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一、實驗目的
清楚培養(yǎng)基的配制原理，了解配制培養(yǎng)基的常用方法和步驟，認識常見滅菌、清毒基本原理及方法，掌握過濾除菌、高壓蒸汽滅菌及干熱滅菌的操作方法。
二、實驗原理
培養(yǎng)基是人工按比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為水、無機鹽、氮源、碳源和生長因素。根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培養(yǎng)基也有多種不一樣的種類和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用廣泛和普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長繁殖之用。干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。
三、器材與試劑
1.器材 ：試管、玻璃棒、培養(yǎng)基、牛角匙、分裝器、三角瓶、燒杯、量筒、天平、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、鑷子、麻繩、棉花、牛皮紙、記號筆、紗布、培養(yǎng)皿、干熱滅菌箱、注射器、吸管、微孔濾膜過濾器等。
2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂
四、實驗步驟
1.稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按配方配制。
2.調(diào)pH不要過頭。
3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時間控制，60ºC以下放物、取物。
4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后先排除冷空氣，降壓回零后取物。
5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。
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