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島津云學(xué)院-課后答疑系列液相色譜篇

2020-03-11 09:42:42來源：島津關(guān)鍵詞：島津閱讀量：1974

我要評(píng)論

　　【儀器網(wǎng) 島津】島津云學(xué)院丨課后答疑系列液相色譜篇

　　“島津云學(xué)院”系列開播以來，得到了眾多用戶的觀看和支持。在直播互動(dòng)交流中，收到了很多提問，島津十分重視各位用戶提出的問題，今天將開啟島津云學(xué)院答疑系列，為大家作詳細(xì)解答！

　　★請(qǐng)問老師一般液相廢液怎么處理？

　　答：需要明確的是，液相色譜的廢液中含有大量的有機(jī)溶劑以及所測(cè)試的樣品，大部分情況下是有毒有害的，因此不能直接傾倒至環(huán)境中，或者流入實(shí)驗(yàn)室下水道中，需要集中處理。一般而言，可以根據(jù)不同的情況進(jìn)行處理：

　　1、如果廢液量較少：如分析型色譜的廢液，可先行收集，然后等待集中處理(尤其是含有劇毒成分的)，比如尋找專業(yè)的廢液回收機(jī)構(gòu)；如果所在單位/機(jī)構(gòu)不支持集中處理，則可以找安全的地方焚燒或填埋(含酸的需用廢堿中和，含鹽的可以直接倒掉)。

　　2、廢液量很大：如制備色譜的廢液，則考慮通過精餾系統(tǒng)，將廢液分餾后再次使用。

　　3、也可以通過“循環(huán)閥”，將未污染的流動(dòng)相再次回收利用。如島津針對(duì)分析型液相和制備型液相都可以提供相應(yīng)的“溶劑循環(huán)閥”，將分析過程中未受到污染的流動(dòng)相，如色譜峰之間平直的基線(僅限于等度條件下)回收至溶劑瓶中，將能夠大大提升溶劑使用效率，降低實(shí)驗(yàn)室成本。

　　★新買色譜柱如何進(jìn)行測(cè)試？

　　答：對(duì)于液相色譜柱來講，拿到一根新的色譜柱，先測(cè)柱效、拖尾因子、柱壓(減去系統(tǒng)壓力)，并記錄結(jié)果。

　　之后使用過程中應(yīng)定期測(cè)試，追蹤色譜柱性能。因不同類型色譜柱差別較大，因此對(duì)于所使用的方法，請(qǐng)根據(jù)說明書上的液相條件和測(cè)試樣品進(jìn)行，同時(shí)需要確保儀器的狀態(tài)正常。

　　★色譜柱用什么沖洗？

　　答：反相與正相體系清洗方式有所不同：

　　反相色譜柱

　　1、日常清洗：10%甲醇水(去除極性大的雜質(zhì))→純甲醇(去除非極性雜質(zhì))。

　　2、流動(dòng)相中含有離子對(duì)試劑：50%有機(jī)溶劑(10倍柱體積)??%有機(jī)溶劑(20倍柱體積)?%有機(jī)溶劑(20倍柱體積)→保存。

　　3、生物樣品(蛋白質(zhì)/多肽)污染的色譜柱：B 5% →B 100%的梯度洗脫×3次(A：0.1%TFA B：0.1%TFA in CH3CN)?%有機(jī)溶劑(20倍柱體積)→保存。

　　正相色譜柱

　　親水性雜質(zhì)吸附太強(qiáng)，常規(guī)清洗效果不明顯，可以逐級(jí)增加洗脫強(qiáng)度，每級(jí)至少確保10倍柱體積。

　　I級(jí)：100%正己烷

　　II級(jí)：100%乙酸乙酯

　　III級(jí)：50%三氯甲烷-50%甲醇

　　注意：回歸到初流動(dòng)相條件時(shí)，請(qǐng)務(wù)必先用異丙醇過渡。

　　★用反相色譜的液相系統(tǒng)可以跑正相嗎？剛剛老師提到用異丙醇沖洗管路，那我跑完反相的用異丙醇沖洗是不是就可以跑正相了？

　　答：一般來講，當(dāng)把一臺(tái)液相色譜儀即當(dāng)作正相色譜用，也當(dāng)做反相色譜用的時(shí)候，在兩個(gè)不同分析模式之間切換時(shí)需要用異丙醇做充分的過渡(比如通宵低流速異丙醇沖洗管路)，其主要是利用異丙醇可以分別與正/反相溶劑互溶的特性，避免流動(dòng)相殘留造成的影響。

　　但有一點(diǎn)需要注意的是，所使用的液相色譜儀是否適用于正相溶劑。通常液相色譜儀的主要設(shè)計(jì)目的是適用于反相體系使用，因此在使用正相體系前，好與供應(yīng)商確認(rèn)，尤其是使用特殊溶劑前(如HFIP，DMF等)。

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